Ceann de na príomhbhuntáistí a bhaineann le cultúr cille ná an cumas ceimic fhisiciúil atáirgeadh cille a ionramháil (ie teocht, pH, brú osmotic, teannas O2 agus CO2) agus timpeallacht fiseolaíoch (ie tiúchan hormóin agus cothaitheach).Chomh maith le teocht, tá an timpeallacht chultúir á rialú ag an meán fáis.
Cé nach bhfuil timpeallacht fiseolaíoch an chultúir chomh soiléir agus a thimpeallacht fhisiceach agus cheimiceach, tuiscint níos fearr ar chomhpháirteanna serum, fachtóirí fáis a aithint atá ag teastáil le haghaidh iomadú, agus tuiscint níos fearr ar mhicrea-thimpeallacht na gcealla sa chultúr.(ie idirghníomhú cille-chealla, idirleathadh gáis, idirghníomhú leis an maitrís) ceadaíonn sé anois línte cille áirithe a shaothrú i meáin serum-saor in aisce.
Bíonn tionchar ag timpeallacht 1.Culture ar fhás cille
Tabhair faoi deara le do thoil go bhfuil na coinníollacha cultúir cille difriúil do gach cineál cille.
Raon na hiarmhairtí a bhaineann le imeacht ó na coinníollacha cultúir a theastaíonn le haghaidh cineál áirithe cille ó léiriú feinitíopaí neamhghnácha go teip iomlán an chultúir cille.Mar sin, molaimid duit dul i dtaithí ar an líne cille a bhfuil suim agat ann agus na treoracha a sholáthraítear do gach táirge a úsáideann tú i do thurgnamh a leanúint go docht.
2. Réamhchúraimí chun timpeallacht chultúir optamaithe a chruthú do do chealla:
Meáin chultúir agus serum (féach thíos le haghaidh tuilleadh eolais)
leibhéil pH agus CO2 (féach thíos le haghaidh tuilleadh eolais)
Déan plaisteach a shaothrú (féach thíos le haghaidh tuilleadh eolais)
Teocht (féach thíos le haghaidh tuilleadh eolais)
2.1 Na Meáin Chultúrtha agus Séiream
Is é an meán cultúir an chuid is tábhachtaí den timpeallacht chultúir, toisc go soláthraíonn sé na cothaithigh, na fachtóirí fáis agus na hormóin a theastaíonn le haghaidh fás cille, agus rialaíonn sé pH agus brú osmotic an chultúir.
Cé go ndearnadh na turgnaimh chultúir tosaigh cille ag baint úsáide as meáin nádúrtha a fhaightear ó eastóscáin fíocháin agus sreabhán coirp, ba chúis le forbairt na meáin chinntitheach an gá atá le caighdeánú, cáilíocht na meáin, agus éileamh méadaithe.Is iad na trí chineál meáin bhunúsacha meáin basal, meáin serum laghdaithe agus meáin serum-saor in aisce, agus tá ceanglais éagsúla acu maidir le forlíonadh serum.
2.1.1 Meán bunúsach
Meán cultúr cille Gibco
Fásann an chuid is mó de na línte cille go maith i meáin bhunúsacha ina bhfuil aimínaigéid, vitimíní, salainn neamhorgánacha, agus foinsí carbóin (cosúil le glúcós), ach ní mór na foirmlithe meáin bhunúsacha seo a fhorlíonadh le serum.
2.1.2 Meán séiream laghdaithe
Buidéal le Gibco Íseal Séiream Meánach
Straitéis eile chun éifeachtaí díobhálacha serum a laghdú i dturgnaimh chultúir cille ná meáin laghdaithe serum a úsáid.Is foirmle meánach bunúsach é meán serum laghdaithe atá saibhir i gcothaithigh agus fachtóirí a dhíorthaítear ó ainmhithe, ar féidir leis an méid serum a theastaíonn a laghdú.
2.1.3 Meán saor ó shéiream
Buidéal le meán saor ó serum Gibco
Téann meán saor ó shéiream (SFM) timpeall ar úsáid serum ainmhithe trí fhoirmlithe cuí cothaithe agus hormóin a chur in ionad serum.Tá foirmlithe meán saor ó serum ag go leor cultúir bunscoile agus línte cille, lena n-áirítear líne táirgeachta próitéin athchuingreach Hamster Ovary (CHO) na Síne, línte cille hybridoma éagsúla, línte feithidí Sf9 agus Sf21 (Spodoptera frugiperda), chomh maith le haghaidh an ósta le haghaidh táirgeadh víreas. (mar shampla, 293, VERO, MDCK, MDBK), etc. Ceann de na príomhbhuntáistí a bhaineann le meán saor ó serum a úsáid ná an cumas an meán a dhéanamh roghnach do chineálacha cille ar leith trí mheascán cuí fachtóirí fáis a roghnú.Liostaíonn an tábla seo a leanas na buntáistí agus na míbhuntáistí a bhaineann le meáin saor ó serum.
Buntáiste
Méadú soiléireacht
Feidhmíocht níos comhsheasmhaí
íonú níos éasca agus próiseáil iartheachtach
Déan measúnú cruinn ar fheidhm na cille
Táirgiúlacht a mhéadú
Rialú níos fearr ar fhrithghníomhartha fiseolaíocha
Brath meán cille feabhsaithe
Míbhuntáiste
Cineál cille riachtanais fhoirmle mheán ar leith
An riachtanas is gá íonacht imoibrí níos airde
Moilliú ar fhás
2.2.1 leibhéal pH
Fásann an chuid is mó de ghnáthlínte cille mamaigh go maith ag pH 7.4, agus tá na difríochtaí idir línte cille éagsúla beag.Mar sin féin, tá sé léirithe go bhfásann roinnt línte cille claochlaithe níos fearr i dtimpeallacht beagán aigéadach (pH 7.0 - 7.4), agus is fearr le roinnt gnáthlínte cille fibroblast timpeallacht beagán alcaileach (pH 7.4 - 7.7).Is fearr a fhásann línte cille feithidí mar Sf9 agus Sf21 ag pH 6.2.
2.2.2 leibhéal CO2
Rialaíonn an meán fáis pH an chultúir agus maolaíonn sé na cealla sa chultúr chun seasamh in aghaidh athruithe ar pH.De ghnáth, baintear amach an maolán seo trí mhaoláin orgánacha (mar shampla, HEPES) nó CO2-décharbónáit-bhunaithe a chuimsiú.Toisc go mbraitheann pH an mheáin ar chothromaíocht íogair dé-ocsaíd charbóin tuaslagtha (CO2) agus décharbónáit (HCO3-), athróidh athruithe ar CO2 an atmaisféir pH an mheáin.Dá bhrí sin, nuair a úsáidtear maolán meánach le maolán CO2-décharbónáit-bhunaithe, is gá CO2 exogenous a úsáid, go háirithe nuair a bhíonn cealla á saothrú i miasa cultúir oscailte nó ag saothrú línte cille trasfhoirmithe ag tiúchan ard.Cé go n-úsáideann an chuid is mó taighdeoirí 5-7% CO2 san aer de ghnáth, is gnách go n-úsáideann an chuid is mó de thurgnaimh chultúir cille 4-10% CO2.Mar sin féin, tá teannas CO2 molta agus tiúchan décharbónáite ag gach meán chun an pH ceart agus an brú osmotic a bhaint amach;le haghaidh tuilleadh faisnéise, féach le do thoil treoracha an mhonaróra mheán.
2.3 Plaistigh a shaothrú
Tá plaistigh saothraithe cille ar fáil i bhfoirmeacha, méideanna agus dromchlaí éagsúla chun freastal ar iarratais éagsúla ar chultúr na gceall.Bain úsáid as an treoir dromchla plaisteach cultúir cille agus treoir coimeádán cultúir cille thíos chun cabhrú leat an plaisteach ceart a roghnú le haghaidh d'iarratas cultúir cille.
Féach ar na plaistigh saothraithe cille Thermo Scientific Nunc (nasc fógraíochta)
2.4 Teocht
Braitheann an teocht is fearr le haghaidh cultúr cille go mór ar theocht an choirp ón óstaigh as a bhfuil na cealla scoite amach, agus go pointe níos lú ar na hathruithe anatamaíocha ar theocht (mar shampla, d'fhéadfadh teocht an chraiceann a bheith níos ísle ná an muscle chnámharlaigh. ).Maidir le cultúr cille, is fadhb níos tromchúisí é róthéamh ná róthéamh.Mar sin, de ghnáth, leagtar an teocht sa ghorlann beagán faoi bhun an teocht is fearr.
2.4.1 An teocht is fearr le haghaidh línte cille éagsúla
Coimeádtar an chuid is mó de línte cille daonna agus mamaigh ag 36 ° C go 37 ° C le haghaidh fáis optamach.
Saothraítear cealla feithidí ag 27°C le haghaidh fáis optamach;fásann siad níos moille ag teochtaí níos ísle agus teochtaí idir 27°C agus 30°C.Os cionn 30°C, laghdaítear beogacht na gcealla feithidí, fiú má fhilleann sé go 27°C, ní éireoidh leis na cealla.
Teastaíonn 38.5°C do línte cille éanlaithe chun an fás uasta a bhaint amach.Cé gur féidir na cealla seo a choinneáil ag 37°C, fásfaidh siad níos moille.
Is féidir le línte cille a dhíorthaítear ó ainmhithe fola fuar (amhail amfaibiaigh, iasc fuaruisce) raon teochta leathan de 15°C go 26°C a fhulaingt.
Am poist: Feb-01-2023