Is féidir le héilliú cultúir cille a bheith ar an bhfadhb is coitianta i saotharlanna cultúir cille, agus uaireanta is cúis le hiarmhairtí an-tromchúiseacha.Is féidir ábhar salaithe cultúir cille a roinnt ina dhá chatagóir, ábhar salaithe ceimiceacha ar nós neamhíonachtaí meánacha, serum agus uisce, endotoxins, plasticizers agus glantach, agus ábhar salaithe bitheolaíochta mar baictéir, múnlaí, giostaí, víris, mycoplasmas tras-ionfhabhtú.Éillithe ag línte cille eile.Cé go bhfuil sé dodhéanta éilliú a dhíchur go hiomlán, is féidir a mhinicíocht agus a dhéine a laghdú trína fhoinse a thuiscint go críochnúil agus trí theicnící aiseiptigh maithe a leanúint.
1. Déanann an chuid seo cur síos ar na príomhchineálacha éillithe bitheolaíochta:
Éilliú baictéarach
Éilliú mold agus víreas
Éilliú mycoplasma
Éilliú giosta
1.1 Éilliú baictéarach
Is grúpa mór de mhiocrorgánaigh aoncheallacha uileláithreach iad na baictéir.De ghnáth ní bhíonn iontu ach cúpla miocrón ar trastomhas agus is féidir leo teacht ar éagsúlacht cruthanna, ó sféir go slata agus bíseanna.Mar gheall ar a uileláithreacht, a méid, agus a ráta fáis tapa, is iad baictéir, mar aon le giostaí agus múnlaí, na héilleáin bhitheolaíocha is coitianta i gcultúr na gcealla.
1.1.1 Éilliú Baictéarach a Bhrath
Is furasta éilliú baictéarach a bhrath trí iniúchadh amhairc ar an gcultúr laistigh de chúpla lá tar éis dó a bheith ionfhabhtaithe;
De ghnáth bíonn cultúir ionfhabhtaithe le feiceáil scamallach (ie, turbid), uaireanta le scannán tanaí ar an dromchla.
Is minic freisin a bhíonn titeann tobann i pH an mheáin chultúir.
Faoi mhicreascóp ísealchumhachta, is cosúil go bhfuil na baictéir mar ghráinní beaga bídeacha ag gluaiseacht idir na cealla, agus is féidir le breathnóireacht faoi mhicreascóp ardchumhachta cruthanna baictéir aonair a réiteach.
1.2Mold & Éilliú víreas
1.2.1 Éilliú Mhúirín
Is miocrorgánaigh eucaryotic den ríocht fhungach iad múnlaí a fhásann i bhfoirm filiméid ilcheallacha ar a dtugtar hyphae.Tá núicléis atá comhionann go géiniteach ar a dtugtar coilíneachtaí nó mícéiliam i líonraí nascacha na bhfiliméad ilcheallach seo.
Cosúil le héilliú giosta, fanann pH an chultúir cobhsaí le linn chéim tosaigh an éillithe agus méadaíonn sé go tapa ansin de réir mar a éiríonn an cultúr ionfhabhtaithe níos tromchúisí agus go n-éiríonn sé scamallach.Faoin micreascóp, bíonn an pór de ghnáth filiméadach, uaireanta mar bhraislí dlúth spóir.Is féidir le spóir go leor múnlaí maireachtáil i dtimpeallachtaí an-dian agus neamhfhósta le linn a gcéime díomhaoin agus ní chuirtear i ngníomh iad ach amháin nuair a bhíonn na coinníollacha fáis ceart i gceist.
1.2.2 Éilliú Víreas
Is gníomhairí ionfhabhtaíocha micreascópacha iad víris a ghlacann innealra na cille óstach le haghaidh atáirgeadh.De bharr a méid fíorbheag tá sé deacair iad a bhrath sa chultúr agus iad a bhaint as imoibrithe a úsáidtear i saotharlanna saothraithe cille.Ós rud é go bhfuil ceanglais an-dian ag an chuid is mó de na víris dá n-óstach, de ghnáth ní dhéanann siad drochthionchar ar chultúir chealla speiceas seachas an t-óstach.
Mar sin féin, is féidir le húsáid cultúir cille atá ionfhabhtaithe le víreas a bheith ina mbaol tromchúiseach do shláinte phearsanra na saotharlainne, go háirithe má fhástar cealla daonna nó príomhúla sa tsaotharlann.
Is féidir ionfhabhtú víreasach i gcultúir cille a bhrath trí mhicreascópacht leictreon, imdhíonadh le sraith antasubstaintí, ELISA, nó PCR le primers víreasacha cuí.
1.3 Éilliú miocplasma
Is baictéir shimplí iad mycoplasmas gan ballaí cille, agus meastar gurb iad na horgánaigh féin-mhacasamhlú is lú iad.Mar gheall ar a mbeagmhéid an-bheag (níos lú ná 1 miocrón de ghnáth), tá sé deacair mycoplasma a bhrath go dtí go sroicheann siad dlús ard agus go dtiocfaidh meath ar chultúir na gceall;Go dtí sin, de ghnáth ní bhíonn comhartha soiléir ar ionfhabhtú.
1.3.1 Éilliú an mhiocoplasma a bhrath
D'fhéadfadh roinnt mycoplasmas a fhásann go mall leanúint i gcultúir gan bás cille a chruthú, ach athraíonn siad iompar agus meitibileacht na gcealla óstaigh i gcultúir.
D’fhéadfadh ionfhabhtú mycoplasma ainsealach a bheith mar thréith ag ráta iomadaithe cille laghdaithe, laghdaigh dlús sáithiúcháin agus agglutination i gcultúr fionraí.
Mar sin féin, is é an t-aon bhealach iontaofa chun éilliú mycoplasma a bhrath ná an cultúr a thástáil go rialta ag baint úsáide as staining fluaraiseacha (m.sh., Hoechst 33258), ELISA, PCR, imdhíonadh, autoradiography, nó tástáil mhiocróbach.
Éilliú 1.4 giosta
Is eukaryotes aoncheallacha den ríocht fhungach iad giostaí, ó chúpla miocrón (go hiondúil) go 40 miocrón (go hannamh).
1.4.1 Éilliú giosta a bhrath
Mar is amhlaidh le héilliú baictéarach, is féidir le cultúir atá éillithe le giosta éirí scamallach, go háirithe má tá an t-éilliú ag dul chun cinn.Is beag athraíonn pH na gcultúr atá éillithe le giosta go dtí go n-éiríonn an t-éilliú níos déine, agus ag an gcéim sin ardaíonn an pH de ghnáth.Faoin micreascóp, feictear giosta mar cháithníní ovoid nó sféarúla aonair agus féadfaidh sé cáithníní níos lú a tháirgeadh.
Ionfhabhtú 2.Cross
Cé nach bhfuil sé chomh coitianta le héilliú miocróbach, is fadhb atá sainithe go soiléir le hiarmhairtí tromchúiseacha é tras-éilliú fairsing go leor línte cille le HeLa agus línte cille eile atá ag fás go tapa.Faigh línte cille ó bhainc chill cáil, seiceáil go rialta saintréithe na línte cille, agus bain úsáid as teicnící aiseiptigh maithe.Cabhróidh na cleachtais seo leat tras-éilliú a sheachaint.Is féidir le méarlorgaireacht DNA, caryotyping agus isitíopáil a dhearbhú an bhfuil tras-éilliú i do chultúr cille.
Cé nach bhfuil sé chomh coitianta le héilliú miocróbach, is fadhb atá sainithe go soiléir le hiarmhairtí tromchúiseacha é tras-éilliú fairsing go leor línte cille le HeLa agus línte cille eile atá ag fás go tapa.Faigh línte cille ó bhainc chill cáil, seiceáil go rialta saintréithe na línte cille, agus bain úsáid as teicnící aiseiptigh maithe.Cabhróidh na cleachtais seo leat tras-éilliú a sheachaint.Is féidir le méarlorgaireacht DNA, caryotyping agus isitíopáil a dhearbhú an bhfuil tras-éilliú i do chultúr cille.
Am poist: Feb-01-2023